PRÁCTICO

   

Objetivos:
  1. Identificación de glúcidos.
  2. Hidrólisis del enlace de un disacárido

Materiales: 

  • Muestras de glúcidos:
    • glucosa
    • maltosa
    • lactosa
    • sacarosa
    • almidón.
  • Tubos de ensayo, gradilla, vaso de bohemia, mechero.
  • Reactivo de Fehling A y Fehling B
  • Lugol
  • HCl diluido y bicarbonato.Reacciones que van a realizarse:
  • Reacción de Fehling:
    • Tomar la muestra que se quiera analizar (normalmente una cantidad de 3 cc.)
    • Añadir 1 cc. de Fehling A y 1 cc. de Fehling B. El líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul.
    • Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero de Laboratorio.
    • La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo.
    • La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso.


    Fundamento: Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). Si el glúcido que se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción del sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo-anaranjado.
  • Reacción del Lugol: Este método se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta característico.
    • Poner en un tubo de ensayo unos 3 cc. del glúcido a investigar.
    • Añadir unas gotas de lugol.
    • Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reacción es positiva.

      Fundamento: La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón.
      No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta.
      Basándote en esta característica te voy a proponer un pequeño juego de magia que te va a sorprender:
      • Una vez que tengas el tubo de ensayo con el almidón y el lugol, que te habrá dado una coloración violeta, calienta el tubo a la llama y déjalo enfriar. !Sorprendido¡.
      • Vuelve a calentar y enfriar cuantas veces quieras.... ¿Dónde está el color?.

    • Poner las muestras de glúcidos en los tubos de ensayo. Pueden prepararse soluciones al 1% aproximadamente. Figura 1.
    • Realizar la Prueba de Fehling como se indica al principio de página. Figura 2.
    • Después de calentar observar los resultados. Figura 3.
    • Estos resultados nos indican que los azúcares: glucosa, maltosa y lactosa tienen carácter reductor.

    Figura 1
    Figura 2
    Figura 3


    Como se veía en la experiencia 1 la sacarosa daba la reacción de Fehling negativa,(Figura 4)por no presentar grupos hemiacetálicos libres.
    Ahora bien, en presencia del ácido clorhídrico (HCl)y en caliente, la sacarosa se hidroliza descomponiéndose en los dos monosacáridos que la forman (glucosa y fructosa).
    Técnica: Tomar una muestra de sacarosa y añadir unas 10 gotas de ácido clorhídrico al 10%. Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling. Observa el resultado (Figura 5). La reacción positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace O-glucosídico de la sacarosa. ( Se recomienda antes de aplicar la reacción de Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling sale mejor en un medio que no sea ácido.)

    Figura 4

    Figura 5

    El polisacárido almidón se colorea de azul-violeta en presencia de yodo, debido no a una reacción química, sino a la fijación del yodo en la superficie de la molécula del almidón, fijación que sólo tiene lugar en frío.

    Figura 6

    Figura 7
    Técnica:
    • Colocar en una gradilla muestras de distintos glúcidos. Figura 6
    • Añadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo.
    • Observar los resultados. Figura 7.
    • Con este método puede identificarse el almidón


  •  Identificación de glúcidos con poder reductor
               
    Todos los monosacáridos y los disacáridos con enlace monocarbonilo, cuando se encuentran en solución a pH alcalino, tienen la capacidad de reducir otros compuestos. Esta capacidad reside en las características del grupo carbonilo (C anomérico en formas cicladas) libre. Esta propiedad, y por tanto, la presencia de un azúcar reductor, se pone de manifiesto mediante la reacción de FEHLING.
                El reactivo de Fehling consta de :
    -Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O
    -Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disuletos en agua

    Fundamento de la reacción: En medio alcalino, el cobre procedente del CuSO4 se encuentra en forma de hidróxido cúprico, y se forma la correspondiente sal Na2SO4. Cuando el   Cu(OH)2 (de color azul) se calienta en presencia de un compuesto reductor se forma óxido cuproso (de color rojo ladrillo).

                      
               
    Si hay un compuesto reductor, el Cu cambia su estado de oxidación de (2+ a 1+), lo que se evidencia por el cambio de color.
               
    Práctica

                Sobre la mesa hay dos soluciones de glúcidos: GLÚCIDO I y GLÚCIDO II. Hay que determinar si son reductores.
    Método:
    1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de glúcido I y en otro tubo 2mL de glúcido II.
    2. Añadir a cada tubo 0.5 mL de Fehling A y 0.5 mL de Fehling B.
    3. Calentar a la llama.
                            Cuestiones
                1. ¿Cúal o cúales son los azúcares reductores?
                2. ¿Quién se oxida y quién se reduce en la reacción?
                3. ¿Para qué sirven el tartrato Na-K y el calor?
                4. ¿Que resultado daría la reacción de Fehling con glucosa? ¿y con sacarosa?


     Identificación de polisacáridos: identificación de almidón mediante la prueba del Lugol

                En solución acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formación de puentes de H entre los grupos OH de la glucosa y las moléculas de H2O. Si a una dislución de almidón de le añade I, esta toma un color azul intenso. Esta característica es específica del almidón, debido a su estructura, y se debe a la adsorción del I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto no es una reacción química, sino una interacción física reversible por métodos físicos. Esto se puede comprobar fácilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer.

    Práctica

                Sobre la mesa hay dos soluciones, solución 1 y solución 2. Hay que identificar cuál de ellas tiene almidón.
    Método:
    1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de la solución 1 y en otro 2 mL de la solución 2.
    2. Añadir a cada uno de los tubos de ensayo 1 gota de Lugol (solución acuosa de iodo y ioduro potásico). Observar el resultado.
    Para comprobar que es una interacción física
    1. Calentar a la llama el tubo que contiene almidón (teñido de azul con I), hasta que desaparezca el color azul.
    2. Enfriar en el grifo y observar la aparición de nuevo de color azul.
                            Cuestiones
                1. ¿Cuál de los dos soluciones contiene almidón?
                2. ¿El almidón daría positiva la reacción de Fehling?
                3. ¿La celulosa daría positiva la prueba del  Lugol?
                4. ¿El azul que aparece tras calentar y enfriar es igual de intenso? ¿Por qué?

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